УКД 619:616.98:612.083
В.В. Герасимов (Республиканский центр профилактики и борьбы со СПИДом, г. Казань)

МЕТОД ПОЛУЧЕНИЯ ХЛАМИДИЙНОГО АНТИГЕНА ДЛЯ ИММУНОЛОГИЧЕСКИХ ТЕСТ-СИСТЕМ

      В последнее время широкое распространение в ретроспективной диагностике инфекционных заболеваний получил иммуноферментный анализ (ИФА). Он широко применяется в практике медицинских диагностических лабораторий. Применение иммуноферментного метода ветеринарными специалистами во многом сдерживается отсутствием в достаточном количестве необходимых компонентов (тест-систем и оборудования), но, учитывая его диагностическую важность, можно уверенно утверждать, что в перспективе ИФА станет достоянием ветеринарных лабораторий.
     При выполнении твердофазного варианта ИФА важным моментом, предшествующим самой реакции, является подготовка антигена. Он должен обладать следующими качествами: хорошо адсорбироваться на твердой фазе (полистирол и др.), с высокой чувствительностью выявлять антитела, не вызывать ложноположительные реакции, быть безопасным для исследователя.
     Для очистки культур хламидий использовали дифференциальное и на градиенте сахарозы центрифугирование суспензий инфицированных желточных оболочек куриных эмбрионов. Готовили ступенчатый (с шагом 5%) градиент сахарозы от 5 до 55%.
     Твердофазный ферментзависимый анализ выполнялся общепринятыми методами. ИФА ставили на микротитрационных планшетах из полистирола отечественных, изготовленных на ПО ВНИИ медицинской техники (г. Москва) и импортных - фирмы Linbro (США). Результаты учитывали визуально по интенсивности окрашивания и инструментально на фотометрах фирмы Titerter модификации Multiskan при длине световой волны 492 нм.
     Для сравнения в ИФА были получены и испытаны лизатные антигены хламидий. В качестве детергентов использовали: додецилсульфат натрия (ДСН), дезоксихолат натрия (ДХН), твин-20, хлороформ (ХФ), тритон Х100.
     Позитивные сыворотки получали путем иммунизации собак и кошек возбудителем хламидиоза. Инфекционный материал вводили внутрибрюшинно двукратно с интервалом 7 дней.
     Негативные сыворотки подбирали из числа проб, полученных от здоровых животных. Предварительно эти сыворотки исследовали в РСК и РНГА.
     При центрифугировании в ступенчатом градиенте сахарозы было получено 13 фракций антигена, из которых были изготовлены путем ультразвуковой обработки антигены для испытания в ИФА.
     Анализ результатов свидетельствует, что наиболее специфичным является антиген, полученный из фракции, собранной в 35%-й сахарозе ступенчатого градиента. Коэффициент его специфичности составлял при концентрации антигена 15,0 и 6,5 мг/мл соответственно 7,2 и 7,1.
     Тестирование в ИФА антигенов, полученных обработкой бактериаль
     
     ной массы различными детергентами, показало, что наибольшая оптическая плотность в лунках с позитивными сыворотками отмечена при использовании препаратов, экстрагированных хлороформом и тритоном Х100.
     Проведенные исследования позволили подобрать эффективные режимы очистки и лизиса антигенов хламидий при конструировании иммуноферментных тест-систем.